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產(chǎn)品名稱：免疫組化試劑盒（抗兔二抗）
產(chǎn)品編號：BLRE006
產(chǎn)品規(guī)格：
| 產(chǎn)品組成 | BLRE006-200T | BLRE006-1000T |
| DAB稀釋液 | 12.5 mL | 62.5 mL |
| 50×DAB原液 | 250 μL | 1.25 mL |
| HRP標記山羊抗兔二抗 | 100 μL | 500 μL |
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說明書 |
產(chǎn)品情況：本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒，適用于一抗來源為兔的抗體的后續(xù)顯色。試劑盒中包含辣根過氧化物酶HRP偶聯(lián)標記的山羊抗兔IgG與DAB；在WB、IHC實驗中，HRP標記的山羊抗兔二抗與兔來源一抗（先與抗原反應(yīng)）結(jié)合后，再與DAB反應(yīng)。DAB是辣根過氧化物酶（HRP）的反應(yīng)底物，在HRP的催化下，DAB產(chǎn)生棕色沉淀，實現(xiàn)信號放大和顯色。
儲存運輸：冰袋運輸；DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存，二抗-20℃保存；有效期12個月。
注意事項：
（一）如果免疫組化顯色時出現(xiàn)背景過深的情況，可考慮選擇以下操作：延長洗滌時間，使用適當?shù)姆忾]液進行封閉，滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，縮短顯色時間，降低二抗?jié)舛鹊龋?br /> （二）如果免疫組化出現(xiàn)沒有顯色或顯色太淺的情況，可考慮選擇以下操作：適當提高一抗、二抗?jié)舛?，延長顯色時間，其次檢測二抗是否被正常顯色；
（三）DAB對人體有害，操作時請小心做好防護，避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
實驗流程：
（一）準備工作
1. 自備PBS、梯度酒精、二甲苯、封片劑、細胞核復(fù)染試劑（推薦蘇木素染液BLRE004、蘇木素分化液BLRE025、蘇木素返藍液BLRE026）等；
2. 二抗工作液配制：使用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀釋HRP標記山羊抗兔二抗，得到二抗工作液。按需配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，保存時間不多于48 h；
3. DAB顯色工作液配制：20 μL 50×DAB原液加入1 mL DAB稀釋液中，混勻備用。按需配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。
（二）實驗步驟
1. 按照常規(guī)免疫組化步驟，組織切片經(jīng)前期脫蠟、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育后，經(jīng)PBS洗三次，每次5 min；
2. 二抗孵育：每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織，室溫孵育30-60 min。經(jīng)PBS洗三次，每次 5min；
3. DAB顯色：每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室溫孵育數(shù)分鐘，通過顯微鏡下觀察控制顯色至預(yù)期效果后，立即水洗終止顯色；
4. （可選）細胞核復(fù)染：切片經(jīng)蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；經(jīng)蘇木素分化液快速分化3-5 s，自來水洗；自來水沖洗返藍或經(jīng)蘇木素返藍液返藍3-5 s；
5. 封片：切片按常規(guī)步驟經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷！