產(chǎn)品名稱:免疫組化試劑盒(抗小鼠二抗)
產(chǎn)品編號(hào):BLRE147
產(chǎn)品規(guī)格:
產(chǎn)品組成 | BLRE147-200T | BLRE147-1000T |
DAB稀釋液 | 12.5 mL | 62.5 mL |
50×DAB原液 | 250 μL | 1.25 mL |
HRP標(biāo)記山羊抗小鼠二抗 | 100 μL | 500 μL |
說明書 |
產(chǎn)品情況:本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒,適用于一抗來源為小鼠的抗體的后續(xù)顯色。試劑盒中包含辣根過氧化物酶HRP偶聯(lián)標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG與DAB;在WB、IHC實(shí)驗(yàn)中,HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗與小鼠來源一抗(先與抗原反應(yīng))結(jié)合后,再與DAB反應(yīng)。DAB是辣根過氧化物酶(HRP)的底物,在HRP的催化下,DAB產(chǎn)生棕色沉淀,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大和顯色。
儲(chǔ)存運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸;DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存,二抗-20℃保存;有效期12個(gè)月。
注意事項(xiàng):
(一)如果免疫組化顯色時(shí)出現(xiàn)背景過深的情況,可考慮選擇以下操作:考慮延長洗滌時(shí)間,使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉,滅活內(nèi)源性過氧化氫酶,縮短顯色時(shí)間,降低二抗?jié)舛鹊龋?br /> (二)如果免疫組化顯色時(shí)出現(xiàn)沒有顯色或顯色太淺的情況,可考慮選擇以下操作:適當(dāng)提高一抗、二抗?jié)舛?,延長顯色時(shí)間,其次檢測二抗是否被正常顯色;
(三)DAB對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心做好防護(hù),避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)流程:
(一)準(zhǔn)備工作
1.自備PBS、梯度酒精、二甲苯、封片劑、細(xì)胞核復(fù)染試劑(推薦蘇木素染液BLRE004、蘇木素分化液BLRE025、蘇木素返藍(lán)液BLRE026)等;
2.二抗工作液配制:使用PBST(pH 7.2-7.4)以1:200比例稀釋HRP標(biāo)記山羊抗小鼠二抗,
得到二抗工作液。按需配制,現(xiàn)配現(xiàn)用,保存時(shí)間不多于48 h;
3.DAB顯色工作液配制:20 μL 50×DAB原液加入1 mL DAB稀釋液中,混勻備用。按需配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。
(二)實(shí)驗(yàn)步驟
1.按照常規(guī)免疫組化步驟,組織切片經(jīng)前期脫蠟、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育后,經(jīng)PBS洗三次,每次5 min;
2.二抗孵育:每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織,室溫孵育30-60 min。經(jīng)PBS洗三次,每次 5min;
3.DAB顯色:每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液,室溫孵育數(shù)分鐘,通過顯微鏡下觀察控制顯色至預(yù)期效果,然后立即水洗終止顯色;
4.(可選)細(xì)胞核復(fù)染:切片經(jīng)蘇木素染液染色3-5 min,自來水洗;經(jīng)蘇木素分化液快速分化3-5 s,自來水洗;自來水沖洗返藍(lán)或經(jīng)蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)3-5 s;
5.封片:切片按常規(guī)步驟經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。
本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷!