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產(chǎn)品名稱：超強(qiáng)高保真PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：5mL
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說(shuō)明書(shū) |
產(chǎn)品情況：Ultra HiFidelity PCR Kit是一種新型高保真PCR擴(kuò)增預(yù)混液，適用于PCR相關(guān)的克隆和檢測(cè)。擴(kuò)增預(yù)混液中的Ultra HiFi DNA Polymerase是通過(guò)定向分子進(jìn)化技術(shù)開(kāi)發(fā)得到的新型快速高保真DNA聚合酶，增強(qiáng)了DNA聚合酶對(duì)模板的親和力，使得此酶在擴(kuò)增速度和延伸能力上得到了提升，增加了PCR成功率和產(chǎn)物量。同時(shí)，此酶具有優(yōu)良的3’- 5’外切酶活性（Proofreading活性），保真性可達(dá)市場(chǎng)上主流產(chǎn)品水平，保證了基因和文庫(kù)擴(kuò)增過(guò)程中的真實(shí)性。此外，本產(chǎn)品中的DNA聚合酶具有熱啟動(dòng)（Hot Start）功能，可有效的控制低溫情況下的非特異擴(kuò)增和酶活損耗，進(jìn)而保證了PCR擴(kuò)增的特異性和穩(wěn)定性。
本產(chǎn)品為一管式預(yù)混Mix形式，內(nèi)含熱啟動(dòng)型的Ultra HiFi DNA Polymerase、超純dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液等PCR反應(yīng)所需組分，只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便。除此之外，本產(chǎn)品中還整合了PCR Enhancer組分，可以提高Ultra HiFidelity PCR Kit對(duì)PCR反應(yīng)抑制劑的耐受能力和對(duì)不同GC含量模板的適應(yīng)能力，因此可以在擴(kuò)增高級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的產(chǎn)物和PCR抑制劑含量較高的PCR體系時(shí)添加使用。
儲(chǔ)存運(yùn)輸：-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
1.為了您的健康安全，請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服且佩戴一次性手套進(jìn)行操作。
使用方法：
① PCR反應(yīng)液的配制：
1. 將2×UltraHiFi Mix (with dye)、引物、模板和ddH2O于室溫條件下（15-25℃）融化，混勻，簡(jiǎn)短離心后于冰盒上備用。
2. 按照下表體系進(jìn)行PCR反應(yīng)體系的配制：
| 組分 | 50µl反應(yīng)體系加入量 | 反應(yīng)濃度 |
| DNA Template | Variable ** | - |
| Primer F* (10 µM) | 1.25 µL | 0.25 µM |
| Primer R* (10 µM) | 1.25 µL | 0.25 µM |
| 2×UltraHiFi Mix (with dye) | 25 µL | 1× |
| PCR Enhancer*** (if needed) | 10 µL | 1× |
| ddH2O | To 50 µL | - |
*引物終濃度為0.25 µM時(shí)可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。擴(kuò)增效率不高時(shí)，可增加PCR反應(yīng)體系中的引物濃度；適當(dāng)減少PCR反應(yīng)體系中的引物濃度則可以增加PCR反應(yīng)特異性。如有必要，可以在0.2-1.0 µM間進(jìn)行優(yōu)化選擇。
**模板DNA用量請(qǐng)參照如下（50 µl PCR反應(yīng)體系）：
| 模板類型 | 模板用量范圍 | 推薦模板用量 |
| 基因組DNA | 1-1000 ng | 100-500 ng |
| 質(zhì)粒DNA | 0.01-100 ng | 1-10 ng |
| cDNA | 1-200 ng | 50-100 ng |
| λDNA | 0.01-100 ng | 1-10 ng |
3. 按步驟2中建議模板及引物用量加入模板、引物和ddH2O，混勻后上機(jī)進(jìn)行PCR反應(yīng)。
② PCR反應(yīng)條件：
1. 使用2×UltraHiFi Mix (with dye) 進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)，請(qǐng)先使用三步法。
注：進(jìn)行三步法擴(kuò)增時(shí)，按延伸速度按照10-15 sec/kb進(jìn)行設(shè)定；對(duì)于DNA長(zhǎng)度≥10 kb的模板或復(fù)雜模板，可將延伸時(shí)間延長(zhǎng)至30 sec/kb。下述反應(yīng)程序僅供參考，實(shí)際情況下，客戶可按照自身情況進(jìn)行更改和調(diào)整。
三步法反應(yīng)程序參考如下：
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 94℃ | 2min | 1 |
| 2 | 98℃ | 10sec |
35 |
| 3 | 60℃ | 30sec | |
| 4 | 68℃ | 10-15sec/kb | |
| 5 | 68℃ | 5min | 1 |
| 6 | 4℃ | Hold | 1 |
2. 當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶或彌散時(shí)，請(qǐng)嘗試兩步法或降落PCR（Step down PCR）。
兩步法反應(yīng)程序參考如下：
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 94℃ | 2min | 1 |
| 2 | 98℃ | 10sec | 35 |
| 3 | 68℃ | 10-15sec/kb | |
| 4 | 68℃ | 5min | 1 |
| 5 | 4℃ | Hold | 1 |
3. 結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5 µl反應(yīng)產(chǎn)物，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
注：2×UltraHiFi Mix (with dye) 中已添加電泳指示劑，無(wú)需額外添加Loading Buffer。
③ 擴(kuò)增模板類型及長(zhǎng)片段擴(kuò)增舉例：
有記錄的樣品適用范圍和擴(kuò)增長(zhǎng)度如下表所示：
| 模板類型 | 有記錄的長(zhǎng)片段擴(kuò)增 |
| 人基因組DNA | -8kb |
| 大鼠基因組DNA | -8kb |
| 大腸桿菌基因組DNA | -8kb |
| 玉米基因組DNA | -8kb |
| 麥基因組DNA | -8kb |
| 水稻基因組DNA | -8kb |
| λDNA | -15kb |
| cDNA | -6kb |
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷！