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產(chǎn)品名稱:2×Taq PCR 預(yù)混試劑Ⅱ(含染料)

產(chǎn)品編號:BLGE181-5ML

產(chǎn)品規(guī)格:5ML
產(chǎn)品組成
產(chǎn)品貨號
BLGE181-5ML
2×Taq PCR MasterMix Ⅱ 5×1 ml
Loading dye in MasterMix Ⅱ  
ddH2O 5 ml

說明書


產(chǎn)品情況:本產(chǎn)品含有高純度的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,為2倍濃度的即用型PCR預(yù)混試劑。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、擴(kuò)增效率高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),可減少人為誤差、節(jié)約操作時(shí)間、降低污染幾率。
本產(chǎn)品不同批次之間誤差很小,適合大規(guī)模基因檢測,半定量PCR實(shí)驗(yàn)和微量DNA的檢測;也適用于常規(guī)PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測定等;特別適合于較長片段(≤5 kb)的擴(kuò)增和一些有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板如GC含量較高(60%<GC≤70%),有二級結(jié)構(gòu)等DNA擴(kuò)增;本產(chǎn)品無外源核酸酶活性,能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因;本產(chǎn)品PCR產(chǎn)物帶A,純化后可直接用T/A載體克隆。
 
儲存運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸;
室溫(15~25℃)可存放一周;如需經(jīng)常使用,可存放于4℃;-20℃可長期保存,多次凍融不影響活性。

注意事項(xiàng):
(一)凍存的2×Taq PCR MasterMix Ⅱ需提前置于冰上解凍,若經(jīng)常使用可于4℃保存;
(二)PCR反應(yīng)體系需在冰上進(jìn)行配制;
(三)PCR反應(yīng)程序設(shè)置時(shí),退火溫度可根據(jù)反應(yīng)體系中引物的Tm值進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整;
(四)操作時(shí)請做好個(gè)人防護(hù),穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
 
實(shí)驗(yàn)流程:
本產(chǎn)品使用時(shí)取適量2×Taq PCR MasterMix Ⅱ溶液,加入模板和引物,并加入ddH2O水補(bǔ)足體積,使MasterMix Ⅱ溶液的濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng)。
(一)PCR反應(yīng)體系(以下舉例僅供參考):
組成成分 體積 終濃度
Template < 1 µg -
Primer F (10 µM) 0.5 µl 0.25µM
Primer R (10 µM) 0.5 µl 0.25µM
2×Taq PCR MasterMix Ⅱ 10 µl
ddH2O 補(bǔ)至20 µl -
 
注:以人基因組DNA為模板,擴(kuò)增1 kb的片段,反應(yīng)體系為20 µl(如反應(yīng)體系不同,可按此比例增加或減少用量)。
(二)PCR反應(yīng)程序(以下舉例僅供參考):
溫度 反應(yīng)時(shí)間 循環(huán)數(shù)
94℃ 3 min 1
94℃ 30 sec 30~35
58℃ 30 sec
72℃ 1 min/kb
72℃ 5 min 1
4℃ holding 1
 
(三)結(jié)果檢測
產(chǎn)品已添加染料,為藍(lán)色,反應(yīng)結(jié)束后直接取6 µl反應(yīng)產(chǎn)物上樣,進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測;根據(jù)上樣孔大小可適當(dāng)調(diào)整上樣量。
 
本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷!