產(chǎn)品名稱:游離脂肪酸(FFA)含量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):BLGE297
產(chǎn)品規(guī)格:
產(chǎn)品組成 | 組分名稱 | BLGE297-100T |
自備溶液 | FFA試劑一 | 50 mL×1 瓶 |
BLGE297-1 | FFA提取液 | 100 mL×1 瓶 |
BLGE297-2 | FFA試劑二 | 20 mL×1 瓶 |
BLGE297-3 | FFA試劑三 | 粉劑×2 瓶 |
BLGE297-4 | FFA標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1 支 |
說(shuō)明書 | 1份 |
說(shuō)明書 |
產(chǎn)品情況:游離脂肪酸,也稱為非酯化脂肪酸,在與白蛋白結(jié)合的血漿中循環(huán)。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān),游離脂肪酸的濃度會(huì)因?yàn)樘悄虿?、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進(jìn)等疾病而上升。
用有機(jī)溶劑萃取 FFA,含有 FFA 的有機(jī)液與三乙醇胺銅反應(yīng),在有機(jī)相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA - Cu,Cu 離子與顯色液反應(yīng)形成紫紅色絡(luò)合物,反應(yīng)形成的顏色深淺與 Cu 離子濃度的關(guān)系符合朗伯一比爾定律,因此可利用此反應(yīng)進(jìn)行比色。
檢出限:0.0390 μmol/mL
線性范圍:0.05 - 2 μmol/mL
儲(chǔ)存運(yùn)輸:試劑盒在2 - 8 ℃干燥室溫條件下,可保存6個(gè)月;冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng):
(一)使用前請(qǐng)核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持;
(二)實(shí)驗(yàn)前建議選擇 2 - 3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè);
(三)試劑三應(yīng)盡量晚配,可在操作到加入試劑二時(shí),再配制試劑三;
(四)必須保證每管的震蕩頻率及時(shí)間一致;
(五)盡量在 30 min 內(nèi)完成測(cè)量;
(六)上層溶液不可直接加入到 96 孔板內(nèi),需與試劑三混勻,并且測(cè)完后要密封好再丟棄;
(七)檢測(cè)試劑多數(shù)為有機(jī)溶劑,因此同一吸頭多次吸取會(huì)造成體積不準(zhǔn),建議及時(shí)更換吸頭。
實(shí)驗(yàn)流程:
(一)自備儀器和用品
50 mL玻璃瓶1個(gè)、10 mL 玻璃瓶1個(gè)、正庚烷、無(wú)水甲醇、氯仿、無(wú)水乙醇、蒸餾水、研缽/勻漿器、冰盒、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板。
(二)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
試劑一:實(shí)驗(yàn)前一天配制;取50 mL帶蓋玻璃瓶1個(gè),按照正庚烷:無(wú)水甲醇:氯仿=24:1:25 的比例配置(自備),蓋緊后混勻;
試劑三:臨用前(盡量晚配)每瓶加入 13 mL 無(wú)水乙醇充分溶解,4℃可保存一周;
標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前將粉末轉(zhuǎn)移到 10 mL 玻璃瓶中,加入 7.8 mL 氯仿充分溶解,即為 5μmol/mL 的棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。
(三)樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量)
1. 血清中 FFA 測(cè)定:將所取血液,室溫靜置 1 h 后,于 4 ℃ 離心機(jī) 3500 rpm 離心 15 min,取上層血清置于 4℃冰箱保存,待測(cè);
2. 組織中 FFA 含量測(cè)定:組織用生理鹽水沖洗干凈后,用吸水紙吸取表面水分,稱取約 0.1 g,加入 1 mL 提取液,勻漿后,8000 rpm,4℃離心 10 min,取上清液,置冰盒上待測(cè)。
(四)操作步驟(盡量在 30 min 內(nèi)完成測(cè)量)
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 550 nm,無(wú)水乙醇調(diào)零;
2. 試劑二在 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上;
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:將標(biāo)準(zhǔn)品用氯仿稀釋成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL;
4. 按下表在 1.5mL 離心管中加入相應(yīng)試劑;
對(duì)照管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
蒸餾水(μL) | 30 | |||
樣本(μL) | 30 | |||
氯仿(μL) | 30 | |||
標(biāo)準(zhǔn)品(μL) | 30 | |||
試劑一(μL) | 300 | 300 | 300 | 300 |
試劑二(μL) | 120 | 120 | 120 | 120 |
充分振蕩10min后,3000rpm,離心10min(保證每管的震蕩頻率及時(shí)間一致) | ||||
上層溶液(μL) | 50 | 50 | 50 | 50 |
試劑三(μL) | 200 | 200 | 200 | 200 |
充分振蕩 2 min 后,靜置 15 min,取 200 μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中,在 550 nm 下測(cè)吸光值,分別記為 A 對(duì)照管、A 測(cè)定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管。(對(duì)照管和空白管各只做 1 - 2 管) |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,以ΔA標(biāo)準(zhǔn)(ΔA=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b。將ΔA(ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管)帶入方程得到x。
2. 血清FFA含量:
FFA 含量(μmol/L)=1000x
3. 組織FFA含量:
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
FFA 含量(μmol/mg prot)=x×V樣總÷(Cpr×V樣總)=x÷Cpr
(2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算
FFA 含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V樣總÷W
V樣總:上清總體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1L=1000mL。
六、實(shí)驗(yàn)實(shí)例
1. 取小鼠血清進(jìn)行樣本處理,按照操作步驟,使用 96 孔板測(cè)得 A 對(duì)照管=0.108、A 測(cè)定管=0.310、ΔA=A測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.310-0.108=0.202,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y =0.6679x+0.019,計(jì)算 x=0.274,按血清含量計(jì)算:FFA 含量(μmol/L)=1000x=1000×0.274=274 μmol/L。
本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷!