產(chǎn)品名稱:DAB顯色試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):BLRE079
產(chǎn)品規(guī)格:
組分編號(hào) | 產(chǎn)品組成 | BLRE079-200T |
BLRE079-1 | DAB稀釋液 | 12.5 ml |
BLRE079-2 | 50xDAB原液 | 250 µL |
說明書 |
產(chǎn)品情況:DAB即3,3-N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根過氧化物酶(HRP)的底物,在HRP的催化下,DAB產(chǎn)生棕色沉淀,該沉淀不溶于水和乙醇,因此在DAB顯色以后還可以用醇溶染料進(jìn)行后續(xù)染色。
DAB顯色試劑盒可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色,也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測(cè)以及細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色,以及原位雜交顯色和其它膜顯色,應(yīng)用范圍極廣。用于免疫組化或原位雜交時(shí),按照每個(gè)樣本使用50 μL顯色液,本試劑盒共可以檢測(cè)最少200個(gè)樣本。
儲(chǔ)存運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸;4℃避光保存,有效期12個(gè)月。
注意事項(xiàng):(一)本產(chǎn)品僅限專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi);
(二)DAB人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,佩戴手套及做好防護(hù)避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
使用方法:
(一)配制DAB工作液:加20 μL 50×DAB原液至1 mL DAB稀釋液中,混勻備用;
注意:請(qǐng)現(xiàn)配現(xiàn)用,不建議長(zhǎng)期保存;
(二)孵育顯色:將DAB工作液直接滴加在處理好的免疫組化切片或WB膜上,室溫避光孵育 3 - 30 min 或更長(zhǎng)時(shí)間,直至顯色至預(yù)期效果;
(三)終止顯色:去除DAB工作液,用PBS或蒸餾水洗滌 2 次,終止顯色。
常見問題及處理方案:
(一)背景顯色過深
1. 在進(jìn)行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時(shí),如果背景顯色太深,需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶。可在4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫,混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活;
2. 可以考慮縮短顯色時(shí)間,或降低二抗?jié)舛龋?br /> 3. 選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液,或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間。
(二) 沒有顯色或顯色太弱
1. 可適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度;
2. 檢測(cè)二抗效果,滴一滴稀釋二抗在膜上,檢測(cè)二抗是否可以被正常顯色;
3. 考慮使用更加靈敏的放大檢測(cè)體系,例如使用生物素檢測(cè)體系;
4. 適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間,另外確定抗原修復(fù)是否對(duì)于使用的一抗是必需的。
本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷!