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瞬時表達(dá)
     
          HEK293表達(dá)系統(tǒng)可在哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行快速的超高得率蛋白制備,該系統(tǒng)基于該細(xì)胞在特定表達(dá)培養(yǎng)基上的高密度培養(yǎng)。我們自主研發(fā)的轉(zhuǎn)染試劑與經(jīng)優(yōu)化的稀釋體系相結(jié)合,進(jìn)行瞬時表達(dá),可使蛋白表達(dá)量大幅度提高。
         CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)可分為瞬時表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá)兩大體系,哺乳動物細(xì)胞自身具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能,其表達(dá)的重組蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面最接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子,更有可能獲得與天然分子相同的生物活性,可在短期內(nèi)獲得一定量的可溶性蛋白,同時可以滿足標(biāo)簽切除、活性測定、HPLC檢測等,可用于基因產(chǎn)物的快速表達(dá)和小規(guī)模制備蛋白等方面。目前,瞬時表達(dá)技術(shù)廣泛應(yīng)用于疾病診斷、抗體生產(chǎn)、疫苗開發(fā)等多個領(lǐng)域,為客戶提供靈活優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

 

 服務(wù)優(yōu)勢 

1)低成本、高效的表達(dá)載體;
2)優(yōu)化的哺乳動物表達(dá)系統(tǒng);
3)翻譯后修飾和正確折疊的高產(chǎn)量表達(dá);
4)豐富穩(wěn)定的細(xì)胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。

 

服務(wù)流程

 

Fig. 哺乳動物細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)流程圖

 

服務(wù)周期

技術(shù)內(nèi)容 周期 交付內(nèi)容
基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) 1-2周  
載體構(gòu)建 克隆至優(yōu)化的表達(dá)載體 1-2周 1.測序報告
2.質(zhì)粒鑒定報告
質(zhì)粒測序
大量質(zhì)粒制備
表達(dá)及純化 細(xì)胞傳代培養(yǎng) 1-2周 1.可行性報告
2.如表達(dá)可行,且QC檢測后有剩余樣品,提供0.1-0.5mg樣品
瞬時轉(zhuǎn)染HEK293/CHO細(xì)胞
蛋白純化
SDS-PAGE及UV分析
大量表達(dá)及純化(可選) 1-2周 1.純化蛋白
2.SDS-PAGE報告
3.質(zhì)檢報告
 

應(yīng)用

 

Fig. 瞬時轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞純化page圖(Lane4和Lane5)

   

穩(wěn)定表達(dá)

           與瞬時轉(zhuǎn)染不同,穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞并整合到細(xì)胞的染色體上,使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因,經(jīng)過抗生素加壓篩選后最終得到可以穩(wěn)定表達(dá)蛋白的細(xì)胞株。從技術(shù)流程上看,穩(wěn)定細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染流程是以瞬時轉(zhuǎn)染為基礎(chǔ),先轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞,再對細(xì)胞池篩選得到穩(wěn)定的細(xì)胞系,剔除未穩(wěn)定整合的細(xì)胞,得到有限稀釋的單克隆穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
           穩(wěn)定細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于重組蛋白和抗體的生產(chǎn)、檢測分析、基因編輯、功能研究等各個領(lǐng)域,表達(dá)的蛋白、抗體穩(wěn)定性更高,批次差異更小。我們的Free Style CHO-S表達(dá)系統(tǒng)對培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)染試劑及稀釋體系等條件進(jìn)行了多方面的優(yōu)化,解決了轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞易出現(xiàn)細(xì)胞結(jié)團(tuán)的問題。

 

服務(wù)優(yōu)勢

1)細(xì)胞來源明確,無污染;
2)直接連續(xù)培養(yǎng),無需轉(zhuǎn)染;
3)可更高密度培養(yǎng);
4)穩(wěn)定表達(dá)蛋白與基因工程抗體;
5)比瞬時轉(zhuǎn)染得到的蛋白更穩(wěn)定,批間差更?。?br /> 6)GS-MSX基因共擴(kuò)增技術(shù),外源基因的拷貝會增加至幾百至幾千產(chǎn)量更高;
7)豐富穩(wěn)定的細(xì)胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。

 

服務(wù)流程

 


 

Fig. 哺乳動物細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)流程圖
 

服務(wù)周期

服務(wù)內(nèi)容 周期 交付內(nèi)容
基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) 1~2周  
載體構(gòu)建 克隆至表達(dá)載體 1~2周
1.測序報告
2.質(zhì)粒鑒定報告
質(zhì)粒測序
大量質(zhì)粒制備
瞬轉(zhuǎn)表達(dá)評估 瞬時表達(dá) 2周 1.評估報告
ELISA或WB檢測表達(dá)水平
穩(wěn)定細(xì)胞株開發(fā) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及篩選 12~20周
1.表達(dá)報告
2.2~3 株穩(wěn)定克隆 (可選)
MTX 擴(kuò)增及篩選
高表達(dá)克隆篩選及穩(wěn)定性篩選
細(xì)胞建庫
大量表達(dá)及純化(可選) 2~3 周
1.純化蛋白
2.SDS-PAGE 報告
3.質(zhì)檢報告