酵母系統(tǒng)蛋白表達(dá)
酵母表達(dá)系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn),培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快、表達(dá)水平高、操作簡(jiǎn)便、成本低廉,蛋白翻譯后能進(jìn)行正確加工、修飾、合理的空間折疊,使得蛋白的可溶性得到提高;與昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)相比,酵母表達(dá)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單,成本低廉,可大規(guī)模進(jìn)行發(fā)酵,是較理想的重組真核蛋白質(zhì)生產(chǎn)制備工具;酵母表達(dá)系統(tǒng)包括畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)和釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng),適合于穩(wěn)定表達(dá)有功能的外源蛋白質(zhì)。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
1)可克服大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的不足,進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯后的修飾合加工;
2)甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)具有翻譯后加工,適合真核生物基因產(chǎn)物正確折疊的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境和糖鏈加工系統(tǒng);
3)獨(dú)特的分泌信號(hào)序列保證了重組蛋白的大分泌量,目的基因產(chǎn)物在培養(yǎng)液中易于純化;
4)可選擇組成性表達(dá)或者誘導(dǎo)表達(dá)兩種表達(dá)體系,X33、GS115、SMD1168等多種菌株和多種載體。
服務(wù)流程
Fig. 酵母表達(dá)技術(shù)流程圖
重組蛋白制備技術(shù)
服務(wù)內(nèi)容 | 服務(wù)周期 | 內(nèi)容介紹 | 交付內(nèi)容 | |
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重組酵母表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建 | 基因獲取及密碼子優(yōu)化 | 2 周 |
1.不同表達(dá)載體 2.不同親和標(biāo)簽 3.分泌或胞內(nèi)表達(dá) |
測(cè)序報(bào)告 |
克隆至表達(dá)載體 | ||||
質(zhì)粒測(cè)序 | ||||
大量質(zhì)粒制備 | ||||
載體線性化及轉(zhuǎn)化 | 載體線性化 | 3~4周 | 不同表達(dá)菌株可選,PCR 鑒定5-10個(gè)克隆 | |
線性化載體電轉(zhuǎn)化 | ||||
重組高拷貝轉(zhuǎn)化子篩選 | 5-10個(gè)克隆篩選, Zeocin抗生素濃度篩選重組子,結(jié)合WB鑒定蛋白表達(dá) | |||
小量表達(dá)及純化(2L) | 小量表達(dá)、純化及條件優(yōu)化 | 2~4周 | 優(yōu)化培養(yǎng)基,菌體密度,甲醇濃度,誘導(dǎo)時(shí)間等 |
1.可行性報(bào)告 2.提供0.1-1.0mg樣品 |
SDS-PAGE 及 UV 分析 | ||||
大量表達(dá)及純化(10L以上) | 2~4周 | 可選擇搖瓶或者發(fā)酵罐培養(yǎng) |
1.純化蛋白 2.生產(chǎn)信息報(bào)告 3.質(zhì)檢報(bào)告 |
應(yīng)用
Fig 1. 重組質(zhì)粒測(cè)序圖譜
Fig 2. 酵母表達(dá)載體
Fig 3. 酵母表達(dá)純化PAGE鑒定圖