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單抗基因釣取及測序分析服務(wù)
     
          雜交瘤細胞培養(yǎng)是單抗制備的重要途徑,傳統(tǒng)培養(yǎng)基需要加入血清,易造成批次間差異和培養(yǎng)體系的不穩(wěn)定,且存在一定的污染風(fēng)險。無血清培養(yǎng)馴化去除培養(yǎng)基中血清成分對后續(xù)抗體質(zhì)量有利。細胞馴化即是通過生產(chǎn)或檢測用細胞的培養(yǎng)條件或培養(yǎng)環(huán)境經(jīng)過一定適應(yīng)性改變,馴化為滿足生產(chǎn)或檢測需求的培養(yǎng)條件。馴化成功的雜交瘤細胞通過轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)大規(guī)模制備不含有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig)和動物病毒的單克隆抗體。
          雜交瘤測序技術(shù)即為雜交瘤細胞抗體基因提取,是通過提取雜交瘤細胞株中的總mRNA,并反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,利用RACE或者物種亞型特異性簡并引物擴增獲取可變區(qū)序列,從而獲得雜交瘤單克隆細胞株的抗體基因信息,該技術(shù)是建立抗體的指紋密碼、知識產(chǎn)權(quán)保護或者基因工程抗體表達的前提。其應(yīng)用價值在于:①為申請保護性專利提供有權(quán)單抗序列信息;②保留單克隆抗體序列信息,防止雜交瘤細胞丟失單抗信息;③幫助目標細胞株的選擇,表達純度更高的重組單克隆抗體;④縮短雜交瘤細胞克隆化耗時過程,加速單克隆抗體產(chǎn)生速度;⑤構(gòu)建嵌合抗體或人源化抗體。

 

服務(wù)優(yōu)勢

1)擁有成熟的細胞馴化工藝平臺,已經(jīng)成功馴化過多個雜交瘤細胞單克隆抗體株;
2)擁有成熟的無血清細胞上清生產(chǎn)線,可以制備從毫克到克級的單克隆抗體;
3)抗體生產(chǎn)程序嚴格按照GMP標準執(zhí)行;
4)嚴格保密客戶的細胞系、抗體等項目信息;
5)經(jīng)過多次驗證的雜交瘤測序引物,每一步驟嚴格采用高保真酶進行擴增,保證序列與天然抗體一致性,具有極高的成功率與快速交付速度;
6)完備的生物信息學(xué)分析,去除冗余序列信息,追蹤確保研發(fā)和生產(chǎn)計劃中的批次一致性;
7)多輪亞克隆細胞后,鑒定細胞單抗亞型,從中挑取3-5株,提取雜交瘤細胞抗體基因;
8)可提供從雜交瘤亞克隆、雜交瘤測序到抗體表達及驗證一站式服務(wù),可根據(jù)您的需求進行選擇。

 

服務(wù)流程



 
服務(wù)周期

服務(wù)流程 周期 交付內(nèi)容
細胞馴化 2~3周 1.無血清雜交瘤細胞株
2.無血清細胞上清
3.純化抗體
4.抗體QC驗證報告
無血清上清抗體生產(chǎn) 3~4周
抗體純化及驗證 3~4周
雜交瘤亞克隆(可選) 3-6周  
RNA提取 1.抗體重鏈及輕鏈序列
2.分別含有抗體重鏈、輕鏈的商業(yè)表達載體
3.詳實的實驗報告和鑒定/驗證報告
4. 完全的知識產(chǎn)權(quán)
5. 實驗報告
反轉(zhuǎn)錄
PCR 擴增重鏈及輕鏈序列
測序驗證
載體構(gòu)建
小試表達分析及ELISA驗證(可選) 2周  
注:①客戶需提供數(shù)量>1×107的雜交瘤細胞;如需小試表達,需提供靶標抗原

應(yīng)用案例

                            Fig 1. 雜交瘤細胞總RNA(A) 和抗體可變區(qū)基因擴增(B)
 
Fig 2. 重鏈可變區(qū)基因測序部分結(jié)果
 
Fig 3. 輕鏈可變區(qū)基因部分測序結(jié)果
 
     Fig 4. 不同序列重鏈輕鏈配對表達結(jié)果